Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nmi: sc-403503-ACT

Le NMI humain (Nmi ; interactor de N-Myc et des STAT) est une protéine adaptatrice inductible par les interférons, qui module la signalisation transcriptionnelle via des interactions directes avec des membres de la famille STAT et d’autres protéines nucléaires régulatrices. Il contribue à des programmes d’expression génique sensibles aux cytokines, en reliant l’activité JAK/STAT à un contrôle plus large de la prolifération cellulaire, de la différenciation et des réponses au stress. NMI a été étudié dans des contextes où la signalisation inflammatoire croise des réseaux oncogéniques, notamment la régulation transcriptionnelle associée à MYC et des voies liées à la transition épithélio-mésenchymateuse. Des altérations de l’expression de NMI ou de ses partenariats de signalisation ont été rapportées dans plusieurs modèles pertinents pour les maladies, ce qui en fait un outil utile pour disséquer des circuits transcriptionnels régulés par l’immunité et des transitions d’état des cellules cancéreuses.

Nmi Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NMI sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nmi Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NMI dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NMI, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nmi. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NMI natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nmi au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nmi dans les cellules tumorales présentant une expression de NMI silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.