Plasmide CRISPR d'Activation (h) NMDAζ1: sc-400593-ACT

GRIN1 code la sous-unité du récepteur NMDA NMDAζ1 (également appelée GluN1), un composant essentiel des récepteurs ionotropes du glutamate hétérotétramériques qui assurent une neurotransmission excitatrice perméable au Ca²⁺ dans le système nerveux central humain. Les récepteurs contenant NMDAζ1 intègrent l’activité synaptique aux voies de signalisation en aval qui régulent la plasticité synaptique, le développement neuronal et l’expression génique dépendante de l’activité, notamment les processus associés à CaMK/CREB et à la MAPK. La fonction de GRIN1 est étroitement liée à l’équilibre excitation/inhibition, à la potentialisation à long terme et à la maturation des réseaux, ce qui en fait un nœud clé des voies impliquées dans l’apprentissage et la mémoire. Une signalisation dérégulée des récepteurs NMDA ainsi que des variations de GRIN1 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui motive des études mécanistiques sur la composition du récepteur et le contrôle transcriptionnel.

NMDAζ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GRIN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NMDAζ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GRIN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GRIN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NMDAζ1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GRIN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NMDAζ1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NMDAζ1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GRIN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.