NMDAε2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400654-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NMDAε2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NMDAε2 Double-Nickase-Plasmid (h) und NMDAε2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GRIN2B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NMDAε2: sc-365597
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NMDAε2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400654-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NMDAε2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400654-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIN2B kodiert die NMDAε2-(GluN2B)-Untereinheit der N-Methyl-D-Aspartat-Rezeptoren, ligandengesteuerter Ionenkanäle, die während der exzitatorischen Neurotransmission den Ca²⁺-Einstrom regulieren. NMDAε2-haltige Rezeptoren prägen synaptische Plastizität, Lernen und Gedächtnis, indem sie neuronale Aktivität an nachgeschaltete Signalwege koppeln, etwa CaMKII/CREB-abhängige Transkription, MAPK/ERK-Signalgebung und aktivitätsabhängige Umgestaltung des Zytoskeletts. Die Funktion von GRIN2B ist eng mit der Entwicklung glutamaterger Synapsen und mit Reaktionen auf exzitotoxischen Stress verknüpft und integriert Signale, die die Reifung dendritischer Spines und die Feinabstimmung neuronaler Schaltkreise beeinflussen. Genetische Variation und Fehlregulation von GRIN2B wurden mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zur synaptischen Signalübertragung und zur Funktion neuronaler Netzwerke unterstützt.
NMDAε2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GRIN2B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GRIN2B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GRIN2B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GRIN2B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.