NMDAε1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400963

概要

GRIN2Aは、グルタミン酸作動性イオンチャネルであるNMDA受容体のサブユニットNMDAε1（GluN2A）をコードしており、他のNMDA受容体サブユニットと会合してCa²⁺透過性の興奮性神経伝達を担います。このサブユニットは受容体の反応速度（キネティクス）やシナプスシグナルの強度を規定し、長期増強（LTP）や長期抑圧（LTD）など、活動依存的なシナプス可塑性を支えます。NMDAε1は、イオン流入をCaMK/CREB依存性の転写プログラムへと結びつけるシナプス後シグナル伝達ネットワークに関与し、より広範な興奮性／抑制性回路の恒常性維持にも寄与します。GRIN2Aの遺伝的変異や発現制御の破綻は、神経発達障害やてんかんスペクトラムの表現型と関連づけられており、神経疾患機序に関わるシナプス機能障害の観点から研究されています。

NMDAε1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGRIN2A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GRIN2A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GRIN2Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NMDAε1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NMDAε1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GRIN2A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NMDAε1の機能に不可欠なGRIN2Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GRIN2Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NMDAε1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNMDAε1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GRIN2A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NMDAε1 HDRプラスミド（h）および NMDAε1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGRIN2Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGRIN2A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。