Nkx-2.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421901

概要

Nkx2-2は、ホメオボックス型転写因子Nkx-2.2をコードしており、発生期の中枢神経系および内胚葉由来組織における胚のパターニングと系譜（ラインエージ）決定に必須の核内制御因子です。腹側神経管では、Nkx-2.2はSonic hedgehog（Shh）シグナル伝達の下流で機能し、前駆細胞ドメインを確立するとともに分化プログラムを駆動し、ニューロン亜型のアイデンティティを形作る遺伝子制御ネットワークを協調的に統括します。膵臓では、Nkx-2.2が膵島系譜の配分やホルモン発現に関連する転写プログラムを制御することで、内分泌細胞の発生と成熟に寄与します。NKX2-2依存的な転写回路の制御異常は、神経発達の進行の変化や内分泌分化の攪乱と関連づけられており、発生生物学および疾患モデル研究における機構解析上の重要な結節点としての有用性を支持しています。

Nkx-2.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNkx2-2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nkx2-2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nkx2-2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nkx-2.2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Nkx-2.2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nkx2-2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Nkx-2.2の機能に不可欠なNkx2-2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nkx2-2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Nkx-2.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNkx-2.2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nkx2-2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Nkx-2.2 HDRプラスミド（m）および Nkx-2.2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNkx2-2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNkx2-2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。