Plásmido CRISPR de Activación (h) Nix: sc-401982-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) Nix es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) Nix incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR Nix (h) y el plásmido de activación CRISPR Nix (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de BNIP3L. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Nix Anticuerpo (H-8): sc-166332
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) Nix | sc-401982-ACT | 20 µg | $397.00 |
El gen humano **BNIP3L (Nix)** codifica una proteína **proapoptótica** asociada a la mitocondria, del tipo **BH3-only**, que funciona como **receptor de mitofagia** al interactuar con proteínas de la familia **LC3/GABARAP** mediante su motivo **LIR**. Nix integra el control de calidad mitocondrial con la muerte celular programada y la adaptación al estrés, conectando la señalización sensible a la hipoxia y la despolarización mitocondrial con la eliminación selectiva de mitocondrias dañadas. Contribuye a la maduración eritroide a través de la eliminación mitocondrial y puede influir en la reprogramación metabólica, la homeostasis de especies reactivas de oxígeno y la señalización inflamatoria. La expresión o el recambio desregulados de BNIP3L/Nix se han asociado con alteraciones en la mitofagia y en fenotipos de apoptosis descritos en biología del cáncer, neurodegeneración y modelos de estrés cardiovascular, lo que respalda estudios mecanísticos de disfunción mitocondrial.
Nix El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BNIP3L sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
Nix El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BNIP3L en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BNIP3L, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nix. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BNIP3L y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nix en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nix en células tumorales con expresión de BNIP3L silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.