Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nischarin: sc-404823-ACT

Le gène humain **NISCH** code la **nischarine**, une protéine d’échafaudage cytosolique initialement identifiée comme un facteur interagissant avec le récepteur à l’imidazoline, qui module la signalisation de l’intégrine α5 et l’organisation du cytosquelette. La nischarine coordonne l’adhésion cellulaire, la migration et le trafic endocytaire via des interactions avec les voies des adhésions focales et des GTPases de la famille Rho, influençant le remodelage de l’actine et la motilité directionnelle. Elle a été associée à la régulation de nœuds de signalisation intracellulaire tels que les cascades MAPK et des programmes de transport vésiculaire qui façonnent la polarité cellulaire et le comportement invasif. Des altérations de l’expression de **NISCH** ont été rapportées dans de multiples contextes pathologiques, notamment en cancérologie et dans des phénotypes neurocomportementaux, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur la migration, les voies associées aux métastases et la signalisation neuronale.

Nischarin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NISCH sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nischarin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NISCH dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NISCH, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nischarin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NISCH natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nischarin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nischarin dans les cellules tumorales présentant une expression de NISCH silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.