Plásmido CRISPR de Activación (h) NIP30: sc-404757-ACT

FAM192A codifica NIP30, una proteína humana conservada implicada en la regulación de la organización nuclear y de los programas de expresión génica mediante interacciones proteína–proteína en complejos asociados a la cromatina. Aunque sus funciones moleculares aún se están precisando, la evidencia disponible vincula a NIP30 con el control transcripcional y con procesos asociados al ARN que influyen en transiciones del estado celular y en la señalización adaptativa al estrés. La alteración de estas capas reguladoras puede afectar vías de proliferación, diferenciación y supervivencia, lo que hace que NIP30 sea de interés para estudios mecanísticos en biología del cáncer y otros trastornos que implican una homeostasis transcripcional desregulada. NIP30 también ofrece un nodo útil para cartografiar reguladores aguas arriba y redes transcripcionales aguas abajo mediante enfoques de genómica funcional.

NIP30 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FAM192A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NIP30 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FAM192A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FAM192A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NIP30. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FAM192A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NIP30 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NIP30 en células tumorales con expresión de FAM192A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.