Plásmido Doble Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG: sc-403321-NIC

CHRNG codifica la subunidad gamma del receptor nicotínico de acetilcolina (nAChR) de tipo muscular, un canal iónico activado por ligando que media la transmisión sináptica rápida en la unión neuromuscular. Durante el desarrollo fetal y perinatal, el receptor que contiene gamma contribuye a la despolarización de membrana dependiente de acetilcolina, al flujo de cationes y al acoplamiento excitación–contracción, favoreciendo la maduración muscular y la inervación motora. La función de CHRNG se integra con la señalización colinérgica, la organización de la membrana postsináptica y los programas de diferenciación de las miofibras dependientes de la actividad. La variación genética o la desregulación de CHRNG se ha asociado con trastornos neuromusculares congénitos caracterizados por disminución del movimiento fetal y formación anómala de la unión neuromuscular, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudiar la sinaptogénesis del desarrollo y el ensamblaje de canales.

Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHRNG en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHRNG. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHRNG. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHRNG alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.