Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418961

概要

Chrng は、ニコチン性アセチルコリン受容体（nAChR）の γ サブユニットをコードする遺伝子であり、nAChR はリガンド作動性の陽イオンチャネルとして他の筋型 nAChR サブユニットと集合し、神経筋接合部におけるアセチルコリン依存的な脱分極を仲介します。マウスの発生過程では、CHRNG は胎児型受容体複合体の主要構成要素で、シナプス形成、活動依存的な骨格筋成熟、ならびに迅速なイオン流入とそれに続く Ca2+ 連動シグナル伝達を介した興奮性制御を支えます。CHRNG の発現量やサブユニット構成が変化すると、神経筋伝達や筋線維の分化プログラムが乱れ得るため、先天性・発生期の神経筋表現型を研究するうえでの機序的な切り口となります。したがって本遺伝子は、運動終板の形成、興奮収縮連関、筋発生のタイミングを規定する経路と関連します。

Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるChrng遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Chrng内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Chrngのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNGタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNGシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Chrng欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNGの機能に不可欠なChrngエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Chrngゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Chrng遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG HDRプラスミド（m）および Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはChrngホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のChrng標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。