Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401641-ACT

CHRNB2 kodiert die β2-Untereinheit neuronaler nikotinischer Acetylcholinrezeptoren (nAChRs), ligandengesteuerter Kationenkanäle, die sich mit α-Untereinheiten zusammenlagern, um die Membranerregbarkeit und calciumabhängige Signalwege zu regulieren. β2-haltige nAChRs koppeln cholinerge Neurotransmission an nachgeschaltete Signalwege, die synaptische Plastizität, Neurotransmitterfreisetzung und die Modulation neuronaler Schaltkreise im zentralen Nervensystem beeinflussen. Eine veränderte CHRNB2-Expression oder Rezeptorzusammensetzung wurde mit neuropsychiatrischen und neuroentwicklungsbedingten Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter Nikotinabhängigkeit und Anfallsanfälligkeit, was seine Rolle für das Gleichgewicht zwischen exzitatorischer und inhibitorischer Aktivität widerspiegelt. Als Untereinheit eines Membranrezeptors ist CHRNB2 zudem relevant für Studien zur Rezeptorassemblierung, zum Transport (Trafficking) und zur pharmakologischen Empfindlichkeit innerhalb cholinerger Signalnetzwerke.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CHRNB2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CHRNB2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CHRNB2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CHRNB2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CHRNB2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.