Plásmido Doble Nickase (m) NGAL: sc-421398-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)NGAL consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa NGAL (m) y el plásmido de doble nickasa NGAL (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Lcn2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NGAL Anticuerpo (H-7): sc-515876
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) NGAL | sc-421398-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen Lcn2 de ratón codifica la lipocalina asociada a la gelatinasa de neutrófilos (NGAL), una lipocalina secretada que se une al hierro asociado a sideróforos y modula la homeostasis del hierro durante las respuestas inmunitarias innatas. NGAL es inducida por estímulos inflamatorios y participa en programas de estrés epitelial a través de vías vinculadas a NF-κB, MAPK y la señalización de citocinas, influyendo en el reclutamiento de neutrófilos, la defensa de la barrera y la actividad antimicrobiana. En modelos murinos, la expresión alterada de NGAL se utiliza con frecuencia como indicador de lesión tisular y de remodelación inflamatoria, incluido el daño renal, la inflamación hepática, la disfunción metabólica y cambios en el microambiente asociado a tumores. Sus funciones en el secuestro de hierro y la regulación inmunitaria convierten a Lcn2 en un nodo útil para estudiar las interacciones huésped–patógeno, el estrés oxidativo y el diálogo cruzado entre estroma e inmunidad.
NGAL El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Lcn2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Lcn2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Lcn2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Lcn2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.