Plasmide CRISPR d'Activation (m) NFATc1: sc-421863-ACT

Nfatc1 code NFATc1, un facteur de transcription de la famille NFAT régulé par le calcium/la calcineurine, qui convertit la signalisation du récepteur des lymphocytes T en programmes d’expression génique durables. NFATc1 coordonne l’activation et la différenciation immunitaires en intégrant l’influx de Ca2+ aux signaux MAPK et AP-1, façonnant la production de cytokines et les décisions de lignage dans les lymphocytes. Chez la souris, NFATc1 est également impliqué dans l’ostéoclastogenèse et le remodelage osseux via des voies induites par RANKL, reliant la signalisation immunitaire à l’homéostasie du squelette. Une activité dérégulée de NFATc1 a été associée à des phénotypes inflammatoires et à une altération de la fonction des cellules immunitaires, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la signalisation, du contrôle transcriptionnel et du destin cellulaire.

NFATc1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Nfatc1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NFATc1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Nfatc1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Nfatc1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NFATc1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Nfatc1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NFATc1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NFATc1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Nfatc1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.