neuroserpin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406912

概要

SERPINI1 は、分泌型のセリンプロテアーゼ阻害因子（serpin）であるニューロセルピンをコードしており、細胞外でのタンパク質分解（プロテオリシス）を調節します。とりわけ、組織型プラスミノーゲンアクチベーター（tPA）を阻害する作用が顕著です。ニューロセルピンはプラスミノーゲン活性化カスケードを制御することで、細胞周囲マトリックスのリモデリング、シナプス可塑性、ならびに神経系におけるプロテアーゼ依存的シグナル伝達に影響を与えます。SERPINI1 はニューロンで高発現しており、病原性変異では誤フォールディングを起こしやすい性質があるため、タンパク質の立体構造安定性や小胞体（ER）の品質管理経路とも関連しています。ニューロセルピンの制御異常は、プロテアーゼのバランスやプロテオスタシスが重要となる状況における神経変性様の表現型やニューロンの脆弱性と関連づけられています。

neuroserpin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSERPINI1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SERPINI1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SERPINI1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、neuroserpinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、neuroserpinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SERPINI1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• neuroserpinの機能に不可欠なSERPINI1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SERPINI1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• neuroserpin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびneuroserpin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SERPINI1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  neuroserpin HDRプラスミド（h）および neuroserpin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSERPINI1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSERPINI1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。