Neuroplastin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422859

概要

マウス Nptn は、糖鎖修飾を受ける免疫グロブリンスーパーファミリーに属する細胞接着タンパク質「ニューロプラスチン」をコードしており、シナプスやその他の膜コンパートメントに豊富に局在し、神経突起の伸長、シナプス構築、ならびに活動依存的な可塑性を支えます。ニューロプラスチンはまた、形質膜 Ca²⁺ ATPase（PMCA）の必須補助サブユニットとしても機能し、Nptn を細胞内カルシウム恒常性および興奮性や遺伝子発現を形作る Ca²⁺ 依存性シグナル伝達に結び付けます。これらの役割を通じて、Nptn は回路形成やシナプス再構築に寄与し、神経発達性・神経精神疾患関連の表現型や、カルシウム制御の破綻に起因するより広範な異常にも関与します。その膜局在と相互作用ネットワークにより、マウス由来の神経細胞・グリアモデルにおいて、接着依存的シグナル、シナプス成熟、カルシウム依存性経路を研究するための有用なハブ分子となります。

Neuroplastin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNptn遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nptn内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nptnのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Neuroplastinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Neuroplastinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nptn欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Neuroplastinの機能に不可欠なNptnエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nptnゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Neuroplastin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNeuroplastin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nptn遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Neuroplastin HDRプラスミド（m）および Neuroplastin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNptnホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNptn標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。