Plasmide CRISPR d'Activation (h) Neurogranin: sc-404119-ACT

Le gène humain **NRGN** code la neurogranin, une protéine postsynaptique se liant à la calmoduline, enrichie dans les épines dendritiques, qui ajuste la disponibilité du Ca2+/calmoduline et soutient la signalisation synaptique dépendante de l’activité. En modulant la dynamique de phosphorylation dépendante de CaMKII et les programmes de plasticité en aval, la neurogranin contribue à la potentialisation à long terme, au remodelage des épines et à la maturation des circuits neuronaux. L’expression de **NRGN** et l’état de phosphorylation de la neurogranin sont liés à la transmission glutamatergique et à des voies plus larges régissant l’apprentissage et la mémoire, notamment les réponses transcriptionnelles régulées par CREB. Un dérèglement de la biologie de la neurogranin a été associé à des phénotypes pertinents pour des maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques du dysfonctionnement synaptique.

Neurogranin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NRGN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Neurogranin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NRGN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NRGN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Neurogranin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NRGN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Neurogranin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Neurogranin dans les cellules tumorales présentant une expression de NRGN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.