Neurogranin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404119-ACT

Das humane Gen **NRGN** kodiert **Neurogranin**, ein postsynaptisches, Calmodulin-bindendes Protein, das in dendritischen Spines angereichert ist, die Verfügbarkeit von Ca2+/Calmodulin fein abstimmt und aktivitätsabhängige synaptische Signalübertragung unterstützt. Durch die Modulation der CaMKII-abhängigen Phosphorylierungsdynamik und nachgeschalteter Plastizitätsprogramme trägt Neurogranin zur Langzeitpotenzierung, zum Umbau von Spines und zur Reifung neuronaler Schaltkreise bei. Die NRGN-Expression und der Phosphorylierungszustand von Neurogranin stehen mit der glutamatergen Transmission sowie weiteren Signalwegen in Zusammenhang, die Lernen und Gedächtnis steuern, einschließlich CREB-regulierter transkriptioneller Antworten. Eine Dysregulation der Neurogranin-Biologie wurde mit krankheitsrelevanten Phänotypen bei neuropsychiatrischen und neurodegenerativen Erkrankungen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien synaptischer Dysfunktion macht.

Neurogranin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NRGN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Neurogranin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NRGN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NRGN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Neurogranin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NRGN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Neurogranin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Neurogranin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NRGN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.