Plasmide CRISPR d'Activation (h) Neurogenin 3: sc-403619-ACT

NEUROG3 (Neurogenin 3) est un facteur de transcription basique à domaine hélice-boucle-hélice (bHLH) qui agit comme un régulateur maître de la spécification des lignages endocrines, en particulier au cours du développement pancréatique, où il favorise l’engagement et la différenciation des progéniteurs endocrines. En se liant à des motifs E-box et en coordonnant des réseaux transcriptionnels avec des voies telles que l’inhibition latérale médiée par Notch, NEUROG3 contribue à contrôler l’équilibre entre le maintien des progéniteurs et les décisions de destinée endocrine. Son activité influence l’émergence des programmes cellulaires producteurs d’insuline, de glucagon et de somatostatine, ce qui en fait un élément central des études sur la formation des îlots pancréatiques et l’identité des cellules endocrines. Une fonction ou une expression altérée de NEUROG3 est associée à des troubles congénitaux du développement des systèmes entéroendocrine et endocrinien pancréatique, et fait fréquemment l’objet d’études dans des modèles d’insuffisance des cellules β liée au diabète et de dysfonction endocrine gastro-intestinale.

Neurogenin 3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NEUROG3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Neurogenin 3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NEUROG3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NEUROG3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Neurogenin 3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NEUROG3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Neurogenin 3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Neurogenin 3 dans les cellules tumorales présentant une expression de NEUROG3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.