Neu4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406284

概要

NEU4はヒトのノイラミニダーゼ4（Neu4）をコードしており、Neu4は糖タンパク質および糖脂質から末端のシアル酸を除去するシアリダーゼです。これにより、複合糖質の代謝回転や、細胞表面および細胞内小器官におけるシグナル伝達が調節されます。Neu4の活性はリソソームやミトコンドリアのシアリル化状態に影響し、糖鎖組成の変化を介して、膜輸送、オートファジー、代謝ストレス応答といった過程に影響を及ぼし得ます。シアリル化依存的な相互作用を組み替えることで、NEU4は糖鎖パターンが再編成される状況において、免疫シグナルや細胞運命決定の制御にも関与します。シアリダーゼ活性の破綻や異常なシアリル化は、炎症性の表現型や、がんに関連する細胞接着・浸潤の変化と関連づけられており、そのためNEU4は機序解明を目的とした糖鎖生物学研究に有用な標的となります。

Neu4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNEU4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NEU4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NEU4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Neu4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Neu4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NEU4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Neu4の機能に不可欠なNEU4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NEU4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Neu4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNeu4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NEU4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Neu4 HDRプラスミド（h）および Neu4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNEU4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNEU4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。