netrin-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403229

概要

NTN4はネトリン-4をコードしており、ネトリン-4は分泌性のラミニン関連ガイダンス因子として、細胞—マトリックス相互作用や方向性移動を調節します。ネトリン-4は、細胞外マトリックス（ECM）の構造調整や、細胞骨格ダイナミクスを形作る受容体介在性シグナル伝達に影響を与えることで、軸索の経路誘導、血管パターニング、組織形態形成に関与します。内皮細胞および上皮細胞の文脈では、インテグリンやラミニン関連経路とのクロストークを介して、接着やバリア機能に影響を及ぼすことがあります。NTN4の発現やシグナル伝達の異常は、がんにおける異常血管新生や浸潤性の亢進、ならびに基底膜リモデリングの変化を伴うその他の疾患と関連づけられています。

netrin-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNTN4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NTN4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NTN4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、netrin-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、netrin-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NTN4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• netrin-4の機能に不可欠なNTN4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NTN4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• netrin-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびnetrin-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NTN4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  netrin-4 HDRプラスミド（h）および netrin-4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNTN4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNTN4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。