NEPH3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406190

概要

KIRREL2はNEPH3をコードしており、NEPH3は免疫グロブリンスーパーファミリーに属する接着分子です。NEPH3は、スリット膜様構造の形成・維持や上皮バリアの組織化を支える、特殊化した細胞間接合部に豊富に存在します。NEPH3は、アクチン動態と接合複合体の安定性を協調的に制御する足場タンパク質との相互作用を介して、接触依存的シグナル伝達および細胞骨格リモデリングに関与します。腎臓に関連する文脈では、NEPH3関連複合体は、ポドサイトの構築、濾過バリアの完全性、ならびに機械的または炎症性ストレスに対する細胞応答と結び付けられています。NEPHファミリーの接着ネットワークの破綻は、糸球体病変や上皮分化の変化と関連して報告されており、そのためKIRREL2は接合部シグナル伝達と組織恒常性を研究するうえで有用な標的となります。

NEPH3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKIRREL2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KIRREL2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KIRREL2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NEPH3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NEPH3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KIRREL2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NEPH3の機能に不可欠なKIRREL2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KIRREL2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NEPH3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNEPH3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KIRREL2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NEPH3 HDRプラスミド（h）および NEPH3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKIRREL2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKIRREL2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。