NELF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-437310

概要

Nsmfは、発生期の神経細胞移動や軸索誘導（経路探索）に関与するガイダンス関連タンパク質であるNELF（nasal embryonic LHRH factor）をコードします。マウスでは、NELFは神経突起伸長の協調、嗅覚／鋤鼻系の発達、ならびに視床下部の神経内分泌回路の形成に関わる過程と関連づけられています。NSMF/NELF機能の異常は、GnRHニューロンの発生および生殖軸の制御における役割を反映して、先天性低ゴナドトロピン性性腺機能低下症やカルマン症候群関連の表現型と関連することが報告されています。これらの特徴により、Nsmfは、発生神経生物学、神経内分泌シグナル伝達、ならびに神経分化モデルにおける遺伝子型—表現型関係を研究するうえで有用な標的となります。

NELF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNsmf遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nsmf内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nsmfのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NELFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NELFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nsmf欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NELFの機能に不可欠なNsmfエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nsmfゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NELF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNELF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nsmf遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NELF HDRプラスミド（m）および NELF HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNsmfホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNsmf標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。