Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Nek2 Double Nickase Plasmid (m): sc-421853-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nek2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nek2 Double-Nickase-Plasmid (m) und Nek2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Nek2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nek2: sc-55601
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nek2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421853-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nek2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421853-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Nek2 (NIMA-related kinase 2) ist eine Serin/Threonin-Kinase, die während der Mitose die Trennung der Zentrosomen, den Aufbau einer bipolaren Spindel und die korrekte Chromosomensegregation koordiniert. In Mauszellen ist die Nek2-Aktivität in die Kontrolle des Zellzyklus und des Spindelkontrollpunkts eingebunden, indem sie zentrosomale Komponenten und die Mikrotubuli-Dynamik reguliert und damit den Übergang durch G2/M sowie die mitotische Genauigkeit beeinflusst. Eine fehlregulierte Nek2-Expression oder Kinaseaktivität ist mit Zentrosomenamplifikation, Aneuploidie und genomischer Instabilität assoziiert – Prozesse, die häufig in Modellen proliferativer und neuroentwicklungsbezogener Erkrankungen untersucht werden. Als zentrosomenassoziierte Kinase wird Nek2 häufig in Signalwegen erforscht, die den Eintritt in die Mitose, die Spindelorganisation und die Kopplung von Zilien und Zellzyklus steuern.
Nek2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Nek2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Nek2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Nek2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Nek2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.