Nek2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421853

概要

Nek2（NIMA related kinase 2）はセリン／スレオニンキナーゼで、中心体に局在し、有糸分裂における中心体の分離、紡錘体の形成、そして正確な染色体分配を制御します。マウス細胞では、Nek2活性が中心体基質のリン酸化や微小管ダイナミクスの調節を通じて細胞周期の進行を協調させ、ゲノム安定性の維持に寄与します。Nek2シグナルの異常は、中心体増幅、異数性、増殖制御の変化と関連づけられており、腫瘍生物学や有糸分裂チェックポイントの健全性に関する研究で重要な分子とされています。さらにNek2は、DNA損傷応答や一次繊毛の動態を制御する経路とも交差しており、細胞分裂に連動したシグナルネットワークを解析するための結節点としても有用です。

Nek2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNek2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nek2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nek2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nek2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Nek2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nek2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Nek2の機能に不可欠なNek2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nek2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Nek2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNek2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nek2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Nek2 HDRプラスミド（m）および Nek2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNek2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNek2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。