Plásmido Doble Nickase (m) NEDL2: sc-435931-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)NEDL2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa NEDL2 (m) y el plásmido de doble nickasa NEDL2 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Hecw2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) NEDL2 | sc-435931-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) NEDL2 | sc-435931-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Hecw2 codifica NEDL2, una ligasa E3 de ubiquitina de tipo HECT que media la ubiquitinación de sustratos para controlar la estabilidad de las proteínas y la salida de señalización. La actividad de NEDL2 contribuye a la proteostasis y a la regulación de procesos celulares como el desarrollo neuronal, la función sináptica y las vías de respuesta al estrés mediante la degradación dirigida de proteínas reguladoras. En modelos murinos y en genética humana, HECW2/NEDL2 se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo, incluidos cambios en la maduración neuronal y defectos de señalización, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la biología del sistema nervioso. Como ligasa E3, NEDL2 constituye un nodo para analizar el control dependiente de ubiquitina de la dinámica de las vías y las transiciones del estado celular.
NEDL2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Hecw2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Hecw2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Hecw2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Hecw2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.