NEDL1 CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-406027

개요

HECW1은 인간 E3 유비퀴틴-단백질 리가아제 NEDL1을 암호화하며, NEDL1은 기질 단백질로 유비퀴틴을 전달해 그 안정성과 신호전달 출력(signal output)을 조절하는 HECT 도메인 효소입니다. NEDL1은 단백질 분해·항상성(proteostasis) 경로 중 유비퀴틴 의존적 과정에 관여하여 단백질 턴오버, 스트레스 반응, 세포 운명 결정에 영향을 미치며, 아폽토시스 신호의 조절 및 신경세포 항상성 유지와의 연관성도 보고되어 왔습니다. NEDL1은 선택적 유비퀴틴화(selective ubiquitination)를 통해 하위 전사 프로그램과 품질 관리 네트워크를 형성할 수 있는데, 이러한 체계는 신경퇴행 및 암과 연관된 세포 표현형에서 흔히 교란됩니다. 따라서 HECW1은 인간 세포 시스템에서 유비퀴틴 경로의 연결 구조와 기질 특이적 조절을 규명하는 데 관심 있는 표적입니다.

NEDL1 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 HECW1 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 HECW1 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 HECW1의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 NEDL1 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 NEDL1 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 HECW1 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• NEDL1 기능에 중요한 HECW1 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 HECW1 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• NEDL1 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 NEDL1 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 HECW1 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  NEDL1 HDR 플라스미드 (h) 및 NEDL1 HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 HECW1 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 HECW1 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.