NEDD8 Double Nickaseプラスミド (h): sc-417924-NIC

NEDD8はユビキチン様修飾因子をコードしており、ネディレーション経路において基質に共有結合的に付加されます。とりわけ、cullin–RING型E3ユビキチンリガーゼ（CRL）の足場となるカリン（Cullin）ファミリータンパク質が主要な標的です。NEDD8の結合は、CRL活性および下流のユビキチン依存的プロテオスタシスを調節することで、タンパク質分解回転、細胞周期進行、DNA複製と修復、ストレスシグナル伝達を制御します。ネディレーションの攪乱はチェックポイント制御、ゲノム安定性、転写プログラムを変化させ、NEDD8経路の異常が、複数の疾患文脈で観察される増殖性表現型やシグナルの再配線と関連することを示します。ユビキチン様翻訳後修飾の中枢ノードとして、NEDD8はプロテオミクス、経路マッピング、機能ゲノミクススクリーニングで広く研究されています。

NEDD8 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NEDD8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NEDD8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NEDD8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NEDD8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。