NEDD4 Double Nickase Plasmid (m): sc-421848-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NEDD4 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NEDD4 Double-Nickase-Plasmid (m) und NEDD4 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Nedd4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NEDD4: sc-518160
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NEDD4 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421848-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NEDD4 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421848-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Nedd4** kodiert die E3-Ubiquitin-Ligase **NEDD4**, ein HECT-Domänen-Enzym, das den Proteinumsatz und die Signalstärke reguliert, indem es die Ubiquitinierung von Membranrezeptoren, Transportern und Signaladapterproteinen katalysiert. Über Interaktionen mit Substraten und Adapterproteinen, die **PPxY-Motive** enthalten, beeinflusst NEDD4 Endozytose, vesikulären Transport und Proteostase und greift in Signalwege wie **EGFR/RTK**, **PI3K–AKT** und **TGF-β/SMAD** ein. NEDD4 moduliert außerdem die Menge von Ionenkanälen und Transportern und trägt damit zum epithelialen Transport und zur neuronalen Erregbarkeit bei. Eine fehlregulierte NEDD4-Aktivität wurde in der Literatur mit veränderter Wachstumssignalgebung, Immun- und Entzündungsreaktionen sowie Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und neuroentwicklungsbedingte Störungen relevant sind, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zur ubiquitinabhängigen Regulation unterstützt.
NEDD4 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Nedd4-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Nedd4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Nedd4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Nedd4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.