NDUFS4 Double Nickase Plasmid (h): sc-405184-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NDUFS4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NDUFS4 Double-Nickase-Plasmid (h) und NDUFS4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NDUFS4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NDUFS4: sc-514002
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NDUFS4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405184-NIC | 20 µg | $410.00 |
NDUFS4 kodiert eine akzessorische Untereinheit des mitochondrialen Atmungskettenkomplexes I (NADH:Ubiquinon-Oxidoreduktase), die den Zusammenbau und die Stabilität von Komplex I in der inneren Mitochondrienmembran unterstützt. Indem NDUFS4 einen effizienten Elektronentransfer von NADH auf Ubiquinon ermöglicht, trägt es zur oxidativen Phosphorylierung, zur Aufrechterhaltung des mitochondrialen Membranpotentials und zur Regulation des zellulären Redoxgleichgewichts bei. Eine Störung der NDUFS4-Funktion steht mit einer verminderten Komplex-I-Aktivität, einer veränderten Handhabung reaktiver Sauerstoffspezies und einer metabolischen Umprogrammierung in Verbindung, die bioenergetische Signalnetzwerke beeinflussen kann. Varianten in NDUFS4 sind mit Phänotypen einer mitochondrialen Komplex-I-Defizienz assoziiert und machen das Gen zu einem relevanten Ziel für mechanistische Untersuchungen mitochondrialer Dysfunktion und von Stressantworten.
NDUFS4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NDUFS4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NDUFS4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NDUFS4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NDUFS4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.