NDUFS3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427031

Visão geral

Ndufs3 codifica a NDUFS3, uma subunidade essencial do complexo I da cadeia respiratória mitocondrial (NADH:ubiquinona oxidorredutase) codificada no núcleo, que sustenta a transferência de elétrons do NADH para a ubiquinona e contribui para o bombeamento de prótons através da membrana mitocondrial interna. A função adequada de NDUFS3 é necessária para uma fosforilação oxidativa eficiente, para a manutenção do potencial de membrana mitocondrial e para a regulação do equilíbrio redox celular. A disrupção de componentes do complexo I pode prejudicar a produção de ATP e aumentar as espécies reativas de oxigênio, influenciando o remodelamento metabólico e a sinalização de estresse. Em modelos murinos, a perturbação de Ndufs3 é relevante para estudar mecanismos de disfunção mitocondrial implicados em fenótipos neuromusculares, cardíacos e associados à neurodegeneração.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NDUFS3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ndufs3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ndufs3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ndufs3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NDUFS3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ndufs3 para a investigação da sinalização de NDUFS3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ndufs3 críticos para a função NDUFS3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ndufs3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo NDUFS3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo NDUFS3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ndufs3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo NDUFS3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR NDUFS3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ndufs3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ndufs3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.