NDUFB5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410902-ACT

Human NDUFB5 kodiert eine kleine akzessorische Untereinheit des mitochondrialen Atmungskettenkomplexes I (NADH:Ubichinon-Oxidoreduktase), die den korrekten Zusammenbau und den Elektronentransfer innerhalb der oxidativen Phosphorylierung unterstützt. Durch ihren Beitrag zum Protonentransport und zur Aufrechterhaltung des mitochondrialen Membranpotenzials beeinflusst NDUFB5 die ATP-Produktion und die Redox-Homöostase – Prozesse, die eng mit ROS-Signalgebung und metabolischer Anpassung verknüpft sind. Eine veränderte Funktion von Komplex I ist für die Biologie mitochondrialer Erkrankungen breit relevant und wurde in Zusammenhängen mit neuromuskulären Funktionsstörungen, Neurodegeneration und Tumormetabolismus beobachtet, in denen bioenergetischer Stress und mitochondriales Remodeling eine wichtige Rolle spielen. Daher ist NDUFB5 ein nützliches Ziel zur Untersuchung der Integrität der Atmungskette, der mito-nukleären Kommunikation und von Signalwegen, die den Energiestoffwechsel mit Zellschicksalsentscheidungen koppeln.

NDUFB5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NDUFB5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NDUFB5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NDUFB5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NDUFB5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NDUFB5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NDUFB5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NDUFB5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NDUFB5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NDUFB5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.