NDUFB5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410902-ACT

ヒトNDUFB5は、ミトコンドリア呼吸鎖複合体I（NADH：ユビキノン酸化還元酵素）の小型の補助サブユニットをコードしており、酸化的リン酸化における適切な複合体の組み立てと電子伝達を支えます。NDUFB5はプロトンポンプ機能およびミトコンドリア膜電位の維持に寄与することで、ATP産生とレドックス恒常性に影響を与えます。これらの過程はROSシグナル伝達や代謝適応と密接に関連しています。複合体I機能の変化はミトコンドリア病の生物学に広く関与しており、バイオエネルギー的ストレスやミトコンドリア再構築が顕著な神経筋機能障害、神経変性、腫瘍代謝などのさまざまな状況で観察されています。そのためNDUFB5は、呼吸鎖の健全性、ミトコンドリア―核間コミュニケーション、そしてエネルギー代謝を細胞運命決定へ結び付ける経路を研究するうえで有用な標的です。

NDUFB5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NDUFB5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NDUFB5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NDUFB5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNDUFB5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NDUFB5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNDUFB5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNDUFB5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNDUFB5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNDUFB5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。