NDST1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404078

概要

NDST1（N-脱アセチル化／N-硫酸転移酵素1）はゴルジ体に局在する重要な酵素であり、ヘパラン硫酸プロテオグリカン生合成におけるN-硫酸化の開始と進行を担い、リガンド結合特異性を規定する硫酸化パターンを形成します。ヘパラン硫酸の構造を制御することで、NDST1は細胞外マトリックスの組織化や、成長因子・モルフォゲンのシグナル伝達経路（FGF、WNT、Hedgehog、VEGF系など）に影響する細胞表面共受容体機能を調節します。これら硫酸化依存的な相互作用は、発生および組織恒常性の中核となる細胞接着、遊走、分化プログラムに影響を及ぼします。NDST1活性の破綻やヘパラン硫酸組成の変化は、腫瘍微小環境のリモデリング、線維化関連シグナル、神経発達表現型など多様な病態生理と関連しており、NDST1はグリコカリックス駆動型シグナルの機構解析に有用な標的となります。

NDST1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNDST1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NDST1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NDST1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NDST1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NDST1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NDST1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NDST1の機能に不可欠なNDST1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NDST1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NDST1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNDST1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NDST1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NDST1 HDRプラスミド（h）および NDST1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNDST1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNDST1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。