Nap-22 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406361

概要

BASP1（Nap-22）は、ミリストイル化された膜関連タンパク質で、神経細胞をはじめとする興奮性細胞に豊富に発現し、皮質アクチンの組織化、膜動態、ならびにホスホイノシチド依存的シグナル伝達に寄与します。WT1 などの核内因子との相互作用を介して転写プログラムを調節し、神経突起伸長、シナプス機能、細胞分化などの過程にも関与します。BASP1 の活性は、細胞骨格リモデリング、形質膜でのシグナル伝達、遺伝子発現のエピジェネティック制御を担う経路と関連づけられています。BASP1 の発現量や制御の異常は、神経発達に関わる表現型や、がんにおける増殖・浸潤プログラムの変化など、複数の疾患コンテキストで報告されています。

Nap-22 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBASP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BASP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BASP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nap-22タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Nap-22シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BASP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Nap-22の機能に不可欠なBASP1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BASP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Nap-22 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNap-22 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BASP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Nap-22 HDRプラスミド（h）および Nap-22 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBASP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBASP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。