Plasmide CRISPR d'Activation (m) NALP9A: sc-433227-ACT

La souris Nlrp9a code NALP9A, un membre de la famille des récepteurs de type NOD (NLR) impliqué dans la détection immunitaire innée et la signalisation liée à l’inflammasome. Comme d’autres protéines NLR contenant un domaine pyrine, NALP9A est associée à des voies qui régulent l’activation des caspases, la maturation des cytokines inflammatoires et des programmes de mort cellulaire sensibles au stress. L’expression de Nlrp9a a été associée aux tissus épithéliaux et reproducteurs, suggérant des rôles dans la surveillance immunitaire liée aux barrières et dans une inflammation dépendante du contexte du développement. La dérégulation de la signalisation médiée par les NLR est pertinente pour les études sur l’autoinflammation et l’homéostasie immunitaire des muqueuses, offrant un cadre pour examiner comment Nlrp9a influence des phénotypes inflammatoires dans des modèles murins.

NALP9A Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Nlrp9a sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NALP9A Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Nlrp9a dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Nlrp9a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NALP9A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Nlrp9a natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NALP9A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NALP9A dans les cellules tumorales présentant une expression de Nlrp9a silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.