NAB2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402117-ACT

NAB2 (NGFI-A-bindendes Protein 2) ist ein nukleärer transkriptioneller Koregulator, der durch Interaktion mit Transkriptionsfaktoren der EGR-Familie unmittelbare Frühgenantworten moduliert und dadurch stimulusabhängige Programme steuert, die Differenzierung, Proliferation und die Anpassung an zellulären Stress kontrollieren. Indem NAB2 die transkriptionellen Outputs nachgeschalteter MAPK/ERK-gekoppelter Signalwege und anderer aktivitätsregulierter Pfade beeinflusst, hilft es, Gennetzwerke zu justieren, die an Wachstumskontrolle und Linienspezifizierung beteiligt sind. Eine veränderte NAB2-Regulation ist relevant für abnorme Transkriptionszustände, wie sie in der Krebsbiologie und anderen proliferativen Erkrankungen beobachtet werden, und NAB2-Genfusionen sowie eine fehlregulierte Expression wurden in bestimmten Kontexten mit tumorigenen Prozessen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen NAB2 zu einem nützlichen Ziel, um die Dynamik zwischen Transkriptionsfaktoren und Koregulatoren zu untersuchen und stimulusresponsive Genexpressionsschaltkreise in menschlichen Zellen zu kartieren.

NAB2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NAB2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NAB2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NAB2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NAB2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NAB2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NAB2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NAB2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NAB2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NAB2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.