N6AMT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406341

概要

EEF1AKMT1 は、翻訳関連因子を修飾するリシンメチルトランスフェラーゼである N6AMT2 をコードしており、タンパク質合成および共翻訳的な品質管理を調整することで、プロテオスタシスの維持に寄与します。N6AMT2 はリボソーム機能の制御や、より広範な RNA 代謝の調節との関連が示されており、細胞の増殖プログラムやストレス適応的な翻訳制御と結び付けられています。翻訳装置のメチル化が変化すると、栄養感知やプロテオトキシックストレスの下流にあるシグナル出力が再編され得るため、EEF1AKMT1 は細胞周期の進行、アポトーシス、代謝適応の研究において重要な対象となります。翻訳やメチルトランスフェラーゼ依存的制御の破綻は、がん研究や神経科学研究の文脈でしばしば観察されることから、臨床的有用性を示唆するものではないものの、疾患関連の表現型における N6AMT2 の関与を検討する根拠となります。

N6AMT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEEF1AKMT1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EEF1AKMT1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EEF1AKMT1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、N6AMT2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、N6AMT2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EEF1AKMT1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• N6AMT2の機能に不可欠なEEF1AKMT1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EEF1AKMT1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• N6AMT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびN6AMT2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EEF1AKMT1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  N6AMT2 HDRプラスミド（h）および N6AMT2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEEF1AKMT1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEEF1AKMT1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。