Plasmide Double Nickase (h) N-type Ca CP α1B: sc-402397-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) N-type Ca CP α1B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide N-type Ca CP α1B Double Nickase (h) et le plasmide N-type Ca CP α1B Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CACNA1B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) N-type Ca CP α1B | sc-402397-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) N-type Ca CP α1B | sc-402397-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CACNA1B code la sous-unité α1B formant le pore des canaux calciques de type N dépendants du voltage (CaV2.2), qui assurent l’entrée de Ca2+ déclenchée par la dépolarisation dans les cellules excitables. Ce canal couple l’activité électrique membranaire à la fusion des vésicules présynaptiques et à la libération de neurotransmetteurs, et s’intègre à des réseaux de signalisation dépendants du Ca2+ qui régulent la plasticité synaptique, l’excitabilité neuronale et l’expression génique dépendante de l’activité. La fonction de CACNA1B est étroitement liée à sa modulation par les récepteurs couplés aux protéines G et par des voies en aval contrôlant la dynamique de la transmission synaptique. Des variations génétiques ou une activité dérégulée de CaV2.2 ont été associées à une modification du traitement nociceptif et à des phénotypes neuropsychiatriques, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques du fonctionnement des circuits neuronaux.
N-type Ca CP α1B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CACNA1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CACNA1B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CACNA1B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CACNA1B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.