Plasmide Double Nickase (m) N-cadherin: sc-419593-NIC

Le gène murin **Cdh2** code la **N‑cadherine**, un récepteur d’adhésion dépendant du calcium qui médie des jonctions homophiliques cellule–cellule et se relie au cytosquelette d’actine via des complexes de caténines. La N‑cadherine coordonne une signalisation dépendante du contact qui influence des programmes de type transition épithélio‑mésenchymateuse, la migration collective, la croissance des neurites et la formation des synapses, et elle interagit avec des voies telles que **Wnt/β‑caténine**, les **GTPases Rho** et **Hippo/YAP/TAZ**, qui régulent la polarité et la mécanotransduction. Au cours du développement et du remodelage tissulaire, **Cdh2** est essentiel à la morphogenèse, à l’organisation des tissus cardiaques et neuronaux, ainsi qu’au maintien de l’intégrité des jonctions d’adhérence. Une expression ou une localisation dérégulée de la N‑cadherine est fréquemment utilisée comme marqueur d’états d’adhésion altérés dans des modèles de fibrose, de troubles du neurodéveloppement et d’invasion des cellules cancéreuses, ce qui étaye des études mécanistiques de phénotypes dépendants de l’adhérence.

N-cadherin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cdh2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cdh2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cdh2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cdh2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.