Myosin X CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402204

概要

ヒトMYO10はミオシンXをコードしており、ミオシンXはフィロポディア先端に局在し、フィロポディアの開始、伸長、ならびにカーゴ輸送を制御する非典型的なアクチン依存性モーターです。ミオシンXはアクチン再構築をインテグリン輸送および細胞—細胞外マトリックス（ECM）接着の動態と結び付け、指向性移動、神経突起伸長、形態形成過程を支えます。細胞骨格制御因子や膜輸送経路との協調を通じて、MYO10はエンドサイトーシス、突起形成、ガイダンスキューへの応答性などの過程に影響します。MYO10の発現や機能の異常は、疾患関連モデルにおける細胞運動性の変化や浸潤性行動と関連づけられており、細胞骨格の組織化とシグナル伝達を結び付ける機構の研究に有用です。

Myosin X CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMYO10遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MYO10内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MYO10のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Myosin Xタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Myosin Xシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MYO10欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Myosin Xの機能に不可欠なMYO10エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MYO10ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Myosin X CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMyosin X CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MYO10遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Myosin X HDRプラスミド（h）および Myosin X HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMYO10ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMYO10標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。