Myosin VI CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401815

概要

MYO6はヒトのミオシンVIをコードしており、細胞内輸送や膜動態を支える、非典型的なアクチン依存性モータータンパク質です。ミオシンVIは、アクチンフィラメントのマイナス端方向へ移動するという独自の特性を持ちます。クラスリン介在性エンドサイトーシス、エンドソームのソーティング、ゴルジ体および分泌経路での輸送、さらに微絨毛やステレオシリアなどのアクチンに富む構造の形成・維持に関与します。アダプタータンパク質やカーゴとの相互作用を介して、細胞移動、接着、機械感覚に関わる過程にも寄与し、細胞骨格のリモデリングと小胞輸送を結び付けます。MYO6の機能異常は聴覚関連の表現型や上皮組織の配列異常と関連することが報告されており、感覚生物学や細胞骨格駆動型輸送の欠陥に関する研究において重要な標的となります。

Myosin VI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMYO6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MYO6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MYO6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Myosin VIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Myosin VIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MYO6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Myosin VIの機能に不可欠なMYO6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MYO6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Myosin VI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMyosin VI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MYO6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Myosin VI HDRプラスミド（h）および Myosin VI HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMYO6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMYO6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。