Myosin IXa CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407473

概要

MYO9AはミオシンIXa（myosin IXa）をコードしており、これはアクチンを基盤とする非典型的なモータータンパク質であると同時に、Rho GTPase活性化タンパク質（RhoGAP）ドメインも有しています。これにより、細胞骨格ダイナミクスと低分子GTPaseシグナル伝達が結び付けられます。ミオシンIXaは、アクチンのリモデリング、膜突起形成、細胞接着の制御を通じて細胞極性と方向性移動に寄与し、収縮性や細胞間接着部位の組織化を制御するRhoA依存性経路にも影響し得ます。これらの機能によりMYO9Aは、協調したモーター活性とRhoシグナルが必要とされる上皮形態形成、神経突起伸長、細胞内輸送といった過程における機構的な結節点として位置付けられます。細胞骨格制御およびRho経路シグナルの破綻は多様なヒト疾患で関与が示唆されているため、MYO9Aは、運動性、バリア機能、形態ダイナミクスに関わるシグナル伝達の疾患関連変化を研究する上で重要な標的となります。

Myosin IXa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMYO9A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MYO9A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MYO9Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Myosin IXaタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Myosin IXaシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MYO9A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Myosin IXaの機能に不可欠なMYO9Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MYO9Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Myosin IXa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMyosin IXa CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MYO9A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Myosin IXa HDRプラスミド（h）および Myosin IXa HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMYO9Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMYO9A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。