Myosin Ia CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-436599

概要

Myo1aはミオシンIaをコードする遺伝子であり、ミオシンIaはアクチン依存性モーターとして、極性化した上皮細胞に多く存在し、頂端面における微絨毛構造の支持や、膜と細胞骨格のカップリングに寄与します。ミオシンIaは、ブラシボーダーの構築と上皮バリア機能の維持を支えるアクチンフィラメント動態、膜張力、ならびに小胞輸送過程に関与します。皮質アクチンネットワークとの相互作用を介して、腸上皮における細胞極性、吸収、機械的応答を制御する経路にも影響を及ぼします。MYO1Aの機能や発現の変化は上皮の恒常性破綻と関連づけられており、バリア障害や腫瘍形成を含む消化管の病態生物学的文脈で研究されています。

Myosin Ia CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMyo1a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Myo1a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Myo1aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Myosin Iaタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Myosin Iaシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Myo1a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Myosin Iaの機能に不可欠なMyo1aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Myo1aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Myosin Ia CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMyosin Ia CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Myo1a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Myosin Ia HDRプラスミド（m）および Myosin Ia HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMyo1aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMyo1a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。