Myosin Ia CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404995

概要

MYO1AはミオシンIaをコードしており、ミオシンIaは単頭のアクチン依存性モータータンパク質で、頂端膜に局在し、極性上皮における微絨毛の構造および膜動態に寄与します。ミオシンIaは、アクチンフィラメントとの相互作用を膜輸送や膜張力と結び付けることで、小胞輸送、刷子縁の組織化、細胞極性の維持といった過程を支えます。これらの細胞骨格および膜リモデリング機能を介して、MYO1Aは上皮バリアの完全性や分化プログラムにも影響します。MYO1Aの発現量や機能の変化は上皮機能障害と関連することが報告されており、消化管疾患や上皮由来疾患の病態生物学の文脈で研究されています。

Myosin Ia CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMYO1A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MYO1A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MYO1Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Myosin Iaタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Myosin Iaシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MYO1A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Myosin Iaの機能に不可欠なMYO1Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MYO1Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Myosin Ia CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMyosin Ia CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MYO1A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Myosin Ia HDRプラスミド（h）および Myosin Ia HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMYO1Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMYO1A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。