Plasmide CRISPR d'Activation (h) myomesin-1: sc-403718-ACT

Le gène humain **MYOM1** code la myomésine‑1, un composant structural essentiel de la ligne M des sarcomères des muscles striés, où elle relie entre eux les filaments épais de myosine et stabilise l’architecture contractile. La myomésine‑1 contribue à la myofibrillogenèse et au maintien du sarcomère, en soutenant la transmission de la force et l’intégrité mécanique des cardiomyocytes et des fibres musculaires squelettiques. Une expression altérée de **MYOM1** ou une désorganisation de la ligne M est associée au remodelage sarcomérique observé dans les cardiomyopathies et d’autres pathologies musculaires, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les mécanismes de dysfonction contractile. En tant qu’échafaudage cytosquelettique au sein du sarcomère, **MYOM1** constitue un nœud expérimental accessible pour explorer les voies qui régissent la structure musculaire, la mécanotransduction et le remodelage adaptatif au stress.

myomesin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYOM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

myomesin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYOM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYOM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de myomesin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYOM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de myomesin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie myomesin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYOM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.