Plasmide CRISPR d'Activation (h) myogenin: sc-400176-ACT

Le gène humain **MYOG** code la myogénine, un facteur de transcription à hélice-boucle-hélice basique (bHLH) qui agit comme régulateur central de la différenciation du muscle squelettique et de la maturation des fibres musculaires. La myogénine coordonne les programmes d’expression génique myogéniques en s’associant aux protéines E et en se liant aux éléments E-box, afin de favoriser la sortie du cycle cellulaire, la fusion des myoblastes et la production de protéines sarcomériques au sein du réseau de régulation myogénique. Son activité s’articule avec des voies qui façonnent l’engagement de lignée et la dynamique de différenciation, notamment des signaux tels que Notch et Wnt qui modulent la myogenèse. Une expression dérégulée de **MYOG** ou des circuits transcriptionnels myogéniques est pertinente dans l’étude d’une régénération musculaire altérée, de phénotypes d’atrophie musculaire et de contextes tumoraux présentant des signatures de différenciation myogénique aberrantes.

myogenin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYOG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

myogenin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYOG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYOG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de myogenin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYOG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de myogenin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie myogenin dans les cellules tumorales présentant une expression de MYOG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.