MyoD CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400092-ACT

MYOD1は、骨格筋形成（筋形成）を統括するマスター制御因子として機能する、ヒトMyoD塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子をコードしている。MyoDはE-boxモチーフに結合し、MEF2ファミリー因子やクロマチンリモデリング因子と協調して筋系譜プログラムを活性化するとともに、細胞周期からの離脱を調整し、筋原性の構造遺伝子・代謝遺伝子の転写制御を通じて分化を促進する。その活性は、Wnt/β-カテニン、Notch、TGF-β/SMAD、MAPK経路などのシグナル入力とも交差し、筋芽細胞のコミットメントや成熟を微調整する。MYOD1の発現や機能の異常は、筋原性状態の変化を示すマーカーとして利用されており、再生不全、筋萎縮の生物学、ならびに横紋筋肉腫モデルにおけるMYOD1関連転写プログラムなどの文脈で研究されている。

MyoD CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYOD1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MyoD CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYOD1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYOD1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MyoDの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYOD1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMyoD依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYOD1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMyoD経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。