Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYCBP: sc-404476-ACT

MYCBP (protéine de liaison à MYC) est un cofacteur nucléaire qui se lie à la région N-terminale de c-MYC et module les programmes transcriptionnels dépendants de MYC contrôlant la croissance cellulaire, le métabolisme et la progression du cycle cellulaire. En influençant la régulation des gènes cibles de l’ARN polymérase II par le complexe MYC/MAX, MYCBP contribue à des voies qui gouvernent la biogenèse des ribosomes, la prolifération et les réponses au stress cellulaire. Une expression altérée de MYCBP ou un déséquilibre de la régulation MYC–MYCBP a été associé à des états transcriptionnels oncogéniques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie tumorale, de l’addiction transcriptionnelle et du remodelage des réseaux de régulation. Ses effets dépendants du contexte sur l’activité de MYC justifient l’exploration de la manière dont la disponibilité des cofacteurs ajuste des phénotypes induits par des oncogènes.

MYCBP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYCBP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYCBP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYCBP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYCBP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYCBP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYCBP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYCBP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYCBP dans les cellules tumorales présentant une expression de MYCBP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.