Plásmido CRISPR de Activación (h) Mucin 5B/MUC5B: sc-401077-ACT

MUC5B codifica la mucina 5B, una mucina formadora de gel de alto peso molecular, fuertemente O‑glicosilada y secretada para formar la barrera de moco viscoelástica en el epitelio de las vías respiratorias y otros epitelios mucosos. MUC5B contribuye al aclaramiento mucociliar al regular la hidratación del moco, el entrecruzamiento de polímeros y el atrapamiento de patógenos, integrándose con programas de diferenciación epitelial y señales inflamatorias que remodelan el entorno de la superficie extracelular. Su expresión está influida por vías impulsadas por citocinas y por el procesamiento secretor en RE/Golgi, que coordinan la biosíntesis y la exportación de mucinas. Los niveles desregulados de MUC5B y la reología alterada del moco se estudian ampliamente en la inflamación crónica de las vías respiratorias y en la biología de la fibrosis pulmonar, lo que lo convierte en un objetivo común para el modelado mecanístico de la homeostasis epitelial.

Mucin 5B/MUC5B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MUC5B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mucin 5B/MUC5B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MUC5B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MUC5B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mucin 5B/MUC5B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MUC5B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mucin 5B/MUC5B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mucin 5B/MUC5B en células tumorales con expresión de MUC5B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.