Mucin 17 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404622-ACT

MUC17 kodiert Mucin 17, ein membranverankertes, stark O-glykosyliertes Mucin, das an epithelialen Oberflächen angereichert ist und dort zur Glykokalyx und zur mukosalen Barriere beiträgt. Durch die Unterstützung der Integrität der apikalen Membran, von Zell-Zell-Interaktionen sowie des Schutzes vor chemischem und mikrobiellem Stress beeinflusst MUC17 die epithelialen Homöostase, die Polarität und wundheilungsassoziierte Prozesse. Veränderte Mucin-Expression und -Glykosylierung werden häufig bei gastrointestinalen und anderen epithelialen Erkrankungen beobachtet, was die Regulation von MUC17 mit Entzündung, Barrierefunktionsstörungen und Tumorbiologie verknüpft. Als oberflächenassoziiertes Mucin ist MUC17 zudem für Studien zur rezeptorähnlichen Signalgebung an der Plasmamembran und zur kontextabhängigen Modulation epithelialer Differenzierungsprogramme relevant.

Mucin 17 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MUC17-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Mucin 17 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MUC17-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MUC17-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Mucin 17-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MUC17-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Mucin 17-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Mucin 17-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MUC17-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.