Plasmide Double Nickase (h) Mts1: sc-401774-NIC

S100A4 code la protéine liant le calcium Mts1, un membre de la famille S100 qui agit comme régulateur cytosolique et extracellulaire de la motilité cellulaire et de la dynamique du cytosquelette. Mts1 interagit avec des cibles telles que la myosine II non musculaire et module des processus incluant le remodelage de l’actine, le renouvellement des adhérences focales et des programmes de type transition épithélio-mésenchymateuse. Via une signalisation dépendante du calcium et un dialogue avec les voies qui gouvernent la migration et l’invasion, S100A4 est fréquemment étudiée dans le contexte de la progression tumorale, de la fibrose et des microenvironnements inflammatoires. Une expression dérégulée de S100A4 est également associée à des modifications de l’activation stromale et du trafic des cellules immunitaires, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer les réseaux de signalisation associés aux métastases.

Mts1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus S100A4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de S100A4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de S100A4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de S100A4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.