Mts1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422782

概要

マウスS100a4はMts1をコードしており、Mts1はカルシウム結合性をもつS100ファミリータンパク質である。Mts1は、カルシウム依存的なアクチン再構築とそれに関連するシグナル伝達ネットワークの制御を介して、細胞骨格ダイナミクス、細胞運動性、ならびに細胞―細胞外マトリックス相互作用を調節する。Mts1は上皮間葉転換（EMT）、線維芽細胞の活性化、免疫細胞トラフィッキングなどの過程と関連し、Rho GTPaseシグナル伝達や細胞外マトリックスのリモデリングを含む経路との関係が報告されている。S100a4/Mts1の発現変化は、浸潤性・遊走促進型の細胞状態を示す分子指標としてしばしば用いられ、炎症に関連した組織リモデリングや腫瘍生物学モデルで研究されている。マウス系では、S100a4は間質―免疫のクロストークや、病的リモデリングに対する系譜特異的な寄与を解析する目的にも用いられる。

Mts1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるS100a4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、S100a4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、S100a4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Mts1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Mts1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、S100a4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Mts1の機能に不可欠なS100a4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、S100a4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Mts1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMts1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、S100a4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Mts1 HDRプラスミド（m）および Mts1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはS100a4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のS100a4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。